Composició química de l'acer inoxidable 347 La magnitud de la sang venosa o capil·lar, específica per a les respostes de cèl·lules T SARS-CoV-2, determina la immunitat a COVID-19.

Gràcies per visitar Nature.com.Esteu utilitzant una versió del navegador amb suport CSS limitat.Per obtenir la millor experiència, us recomanem que utilitzeu un navegador actualitzat (o desactiveu el mode de compatibilitat a Internet Explorer).A més, per garantir un suport permanent, mostrem el lloc sense estils ni JavaScript.
Controls lliscants que mostren tres articles per diapositiva.Utilitzeu els botons enrere i següent per moure's per les diapositives, o els botons del controlador de diapositives al final per moure's per cada diapositiva.

Composició química d'acer inoxidable 347

Composició química del tub de bobina d'acer inoxidable 347

La composició química i les propietats mecàniques del tub de bobina d'acer inoxidable 347 són les següents:
- Carboni - 0,030% màx
- Crom - 17-19%
- Níquel - 8-10,5%
- Manganès - 1% màxim

Propietats mecàniques del tub de bobina d'acer inoxidable 347

Segons el fabricant de tubs de bobina d'acer inoxidable 347, propietats mecàniques del tub de bobina 347:
- Resistència a la tracció (psi) - 75.000 min
- Límit de rendiment (psi) - 30.000 min
- Elongació (% en 2″) – 25% min
- Duresa Brinell (BHN) – 170 màx

Aplicacions i usos del tub de bobina d'acer inoxidable 347

• Tub de bobina d'acer inoxidable 347 utilitzat als molins de sucre.
• Tub de bobina d'acer inoxidable 347 utilitzat en fertilitzants.
• Tub de bobina d'acer inoxidable 347 utilitzat a la indústria.
• Tub de bobina d'acer inoxidable 347 utilitzat a les centrals elèctriques.
• Tub de bobina d'acer inoxidable 347 utilitzat en aliments i productes lactis.
• Tub de bobina d'acer inoxidable 347 utilitzat a les plantes de petroli i gas.
• Fabricant de tubs de bobina d'acer inoxidable 347 utilitzat a la indústria de la construcció naval.

Es creu que les cèl·lules T específiques de SARS-CoV-2 protegeixen contra la infecció i la progressió de COVID-19, però no hi ha proves directes per a això.Aquí, vam comparar les mesures de sang sencera de cèl·lules T positives d'interferó-γ específics de SARS-CoV-2 amb resultats positius de les proves de diagnòstic de COVID-19 (PCR i/o flux lateral) dins dels 6 mesos posteriors a la recollida de sang de Lian.Entre els 148 participants que van donar mostres de sang venosa, la magnitud de la resposta de cèl·lules T específiques de SARS-CoV-2 va ser significativament més alta en els que es van mantenir protegits que en els que estaven infectats (P <0,0001).% de risc d'infecció, mentre que l'alta intensitat va reduir aquest risc al 5,4%.Aquests resultats es van generalitzar a 299 participants addicionals que van provar un assaig de sang capil·lar escalable que podria facilitar l'accés a les dades d'immunitat de cèl·lules T a escala de població (14,9% enfront del 4,4%).Així, la mesura de les cèl·lules T específiques per al SARS-CoV-2 pot predir el risc d'infecció i s'hauria d'avaluar quan es controla l'estat immune individual i de la població.
Mesurar i comprendre la resposta immune a la infecció per SARS-CoV-2 és important per desenvolupar estratègies futures efectives per minimitzar els impactes econòmics i de salut pública dels futurs brots de COVID-19.La identificació de correlats immunitaris proporcionarà informació important sobre la susceptibilitat d'una població a la infecció vírica, possiblement una alerta primerenca de les hospitalitzacions màximes i també permetrà a les persones gestionar personalment el seu risc d'infecció i el risc d'infectar altres persones.La vigilància immune ha demostrat ser fonamental per avaluar l'eficàcia de les vacunes contra la COVID-19 en pacients sans i d'alt risc1,2,3, especialment en mutants SARS-CoV-24, i la detecció de persones immunodeprimides suposarà la necessitat d'augmentar la immunitat Vacuneu-vos i prevenir. futurs brots.
El nivell d'immunitat d'un individu a la infecció per SARS-CoV-2 depèn de múltiples factors: càrrega viral en el moment de l'exposició, variants del virus, edat, estat previ de vacunació/infecció, comorbiditats, medicaments i, el més important, infecció anti-SARS-CoV. .2 La resposta immune adaptativa es produeix en el moment de l'exposició al virus5.L'avaluació de la resposta immune a la infecció i/o vacunació per SARS-CoV-2 s'ha centrat en assajos serològics que mesuren la presència d'anticossos específics per a una proteïna estructural (per exemple, glicoproteïna d'espiga).Tanmateix, la presència o absència d'anticossos per si sols no determina amb precisió una resposta immune protectora, ja que les respostes s'atenuen significativament amb el temps6 i la neutralització de les variants del SARS-CoV-2 en individus en recuperació o vacunats doblement Activitat feble, que podria provocar una gran nombre d'infeccions avançades7.De fet, la protecció contra la COVID-19 simptomàtica causada per la variant Omicron (B.1.1.529) va disminuir fins a un 10% després de només 4-6 mesos de vacunació amb ARNm, tot i que la protecció contra la malaltia greu va persistir > 68% durant almenys 7 mesos8.Mesurar les respostes de cèl·lules T de memòria adaptativa, que confereixen protecció a llarg termini contra la infecció vírica, és el millor indicador de susceptibilitat a la infecció per SARS-CoV-2 i, per tant, una millor indicació del risc de donar positiu per a la COVID-199, ja que la T específica les cèl·lules poden prevenir la infecció.sense seroconversió10,11.No obstant això, la mesura de les respostes de les cèl·lules T ha rebut menys atenció a causa de les dificultats metodològiques i els problemes logístics en l'obtenció i transport de mostres de sang venosa, especialment quan es realitzen grans estudis observacionals per avaluar l'eficàcia de la vacuna i controlar la immunitat.Tanmateix, els individus vacunats mostren una activitat robusta de cèl·lules T contra variants de SARS-CoV-2, que pot compensar la pèrdua de reactivitat dels anticossos per limitar la gravetat de COVID-1912,13.
Aquí, vam intentar entendre si una sola mesura de la resposta de les cèl·lules T SARS-CoV-2 podria predir el risc absolut d'infecció per SARS-CoV-2 dins dels 6 mesos posteriors a la presa de mostres de sang, independentment dels factors previs que influeixen en la immunitat.Per tal que la prova de cèl·lules T sigui d'alt rendiment i s'apliqui a estudis més grans, també hem intentat fer la prova miniaturitzada perquè es pugui realitzar amb una mostra de sang capil·lar.
Hem mesurat les respostes immunes cel·lulars i humorals en donants sans mitjançant una detecció combinada de cèl·lules T SARS-CoV-2 i anticossos IgG basats en sang venosa sencera (per a les característiques dels participants, vegeu març de 2022 14. En donants vacunats, SARS-CoV-2-). Les respostes cel·lulars T específiques es van determinar mesurant els nivells plasmàtics d'interferó-γ (IFN-γ) després de l'estimulació de la sang sencera amb el pèptid SARS-CoV-2 (com anteriorment, refs. 14,15,16,17,18) i les respostes IgG associades amb nucleocàpsida (N) es va incrementar en els que van informar d'una infecció prèvia, tot i que ambdues respostes van ser més altes en donants no vacunats prèviament infectats, màxims al cos (Fig. 1a, b). Respostes IgG contra glicoproteïnes de punta (RBD, S1, S2) eren més alts en donants vacunats prèviament infectats (figura 1c-e).
es van mesurar les respostes de cèl·lules T IFN-γ+ específiques de SARS-CoV-2 mitjançant un assaig venós de sang sencera i basant-se en les vacunacions dels participants i l'estat d'infecció anterior per SARS-CoV-2 (confirmat per PCR i/o prova de flux lateral)' Vac + /Inf +' n = 60 (verd), "Vac + /Inf-" n = 82 (blau), "Vac-/Inf +" n = 4 (groc), "Vac-/Inf-" n = 1 (no aplicat).Les reaccions d'unió d'IgG específiques de SARS-CoV-2 tenen com a objectiu la nucleocàpsida ("N") (b; ****P <0,0001, **P = 0,0016), domini d'unió al receptor amb punta ("RBD") (c; ** P = 0,0022, *P <0,015), subunitat de punta 1 ("S1") (d; ***P = 0,0005, *(Vac + /Inf+ vs. Vac + /Inf-) P = 0,022, *(Vac- /Inf+ vs. Vac+/Inf-) P = 0,012) i la subunitat màxima 2 ("S2") (e) es van mesurar mitjançant proves venoses de sang sencera i basant-se en la vacunació dels participants i prèvia SARS -CoV-2 (confirmat per PCR i/ o prova de flux lateral) estat infecciós."Vac + /Inf +" n = 60 (verd), "Vac + /Inf-" n = 71-82 (blau), "Vac-/Inf +" n = 4 (groc).Les comparacions es van fer mitjançant la prova de Kruskal-Wallis, ajustada per a múltiples comparacions mitjançant la prova de Dunn.Les dades es mostren com a gràfics (línia central a la mediana, límit superior al percentil 75, límit inferior al percentil 25) amb bigotis als valors mínim i màxim.Cada punt representa un donant.Les dades en brut es proporcionen en forma de fitxers de dades en brut.
Després de la presa de mostres de sang, se'ls va demanar als participants que autoinformessin resultats positius de PCR i/o proves de flux lateral per a COVID-19;si els participants van donar positiu entre l'1 de setembre de 2021 i el 29 de desembre de 2021, es suposava que estaven infectats amb la variant Delta (B.1.617.2) i Omicron (B.1.1.529) a Public Health Wales després del 29 de desembre de 2021, quan aquesta opció preocupant esdevé dominant.Entre 148 donants avaluables, vam observar una taxa d'infecció del 26,3% (39/148) en els 6 mesos posteriors a la donació de sang, 38 dels quals van rebre una segona o tercera dosi de la vacuna COVID-19 (l'avanç de la infecció es va produir després de Pfizer/BioNTech ( BNT162b2) vacuna d'ARNm o vacuna AstraZeneca (ChAdOx1 nCoV-19));també es va infectar un donant no vacunat.La magnitud de les respostes de cèl·lules T positives d'IFN-γ específiques de SARS-CoV-2 va ser significativament menor en aquells que van informar d'una prova diagnòstica positiva per a COVID-19 que en donants no infectats (P <0, 0001; Fig. 2a), principalment a causa de inducció òptima de respostes de cèl·lules T per vacunació en alguns participants (P = 0, 050; figura suplementària 1).No hi va haver cap correlació entre la magnitud de la resposta de les cèl·lules T IFN-γ+ i el temps fins a un resultat positiu de la prova COVID-19 (figura suplementària 2).En canvi, ni les respostes d'IgG d'unió a RBD-, S1-, S2 (figures 2b-d) ni les respostes d'anticossos neutralitzants de RBD-, S1 eren específiques per a SARS-CoV-2 de tipus salvatge o delta (B.1.617).) (figura suplementària 3) pot distingir entre persones amb risc d'infecció.Tanmateix, les baixes respostes d'IgG lligades a N contra SARS-CoV-2 es van correlacionar amb el risc d'infecció per COVID-19 (P = 0,0084; Figura 2e);els que van donar positiu tenien un 85% menys de probabilitats (P = 0,00035; O 0,15, 95).% CI: 0,047–0,39 (figura suplementària 4).
Les mostres de sang venosa de donants sans (n ​​= 148) van avaluar les respostes de cèl·lules T IFN-γ+ específiques del SARS-CoV-2 (a; ****P <0,0001) i la unió del receptor Spike al SARS-CoV específic. -2 estímul.domini ("RBD") (b), subunitat de punta 1 ("S1") (c), subunitat de punta 2 ("S2") (d) i nucleocàpsida ("N") (e; **P = 0,0084) .S'han identificat els participants que van donar positiu per a la COVID-19 (PCR i/o flux lateral);totes les infeccions es van produir dins dels 6 mesos posteriors a la presa de mostres de sang.Les comparacions es van fer mitjançant una prova de Mann-Whitney de dues cues.Les dades es mostren com a gràfics (línia central a la mediana, límit superior al percentil 75, límit inferior al percentil 25) amb bigotis als valors mínim i màxim.Cada punt representa un donant.ns no és important.El mapa de calor f mostra les correlacions de rang de Spearman entre variables per al conjunt de dades especificat.Les comparacions que no eren estadísticament significatives es van excloure de la matriu i es van marcar amb cel·les en blanc.Les dades en brut es proporcionen en forma de fitxers de dades en brut.
El tall positiu diagnòstic preestablert de 14 es va considerar massa arbitrari per avaluar el risc de reinfecció, de manera que es van establir intervals interquartils per establir paràmetres de risc absolut.El model estadístic, que només incloïa variables que van tenir un efecte significatiu en els resultats, va mostrar que la magnitud de la resposta de cèl·lules T IFN-γ+ específica del SARS-CoV-2 era el biomarcador immune més important per determinar les possibilitats d'un individu de ser-ho. provat per COVID.-19 positius (figura 2f i figura suplementària 4).Pacients amb una resposta de cèl·lules T IFN-γ+ específica per SARS-CoV-2 al tercer (194-489 pg/ml IFN-γ) i quart (>489 pg/ml IFN-γ) quartils 65% (P = 0,055); OR 0,35, IC del 95%: 0,11-1,00) i el 90% (P = 0,0050; OR 0,098, IC del 95%: 0,014-0,42) van tenir més participants.Les possibilitats són escasses (figura suplementària 4).En general, els participants amb una resposta específica de cèl·lules T SARS-CoV-2 de sang venosa ≤79 pg/mL IFN-γ tenien un risc del 43,2% d'infecció progressiva als 6 mesos, en comparació amb una resposta > 489 pg/mL.ml d'IFN-γ tenien un risc d'infecció del 5,4% (taula 2).
Les proves de sang sencera venosa tenen un abast limitat a causa de la necessitat de recollida de mostres per part del flebotomista.Per augmentar la disponibilitat de proves de cèl·lules T i IgG per SARS-CoV-2, s'ha desenvolupat un mètode alternatiu de mostreig de sang capil·lar per permetre als participants obtenir mostres de sang de punxada a casa.Segons el que sabem, no hi ha hagut informes anteriors sobre la mesura de la funció de les cèl·lules T específiques de l'antigen en mostres de sang capil·lar.Anteriorment s'ha demostrat una forta correlació entre els recomptes de limfòcits obtinguts mitjançant mostres de sang capil·lar i venosa comparables.A més, s'ha informat que els assajos basats en sang sencera que mesuren les respostes de cèl·lules T específiques de SARS-CoV-2 només utilitzen 320 μL de sang venosa,20 eliminant les preocupacions sobre la freqüència de les cèl·lules T progenitores en mostres de sang capil·lar.
Hem utilitzat aquest assaig col·laboratiu estandarditzat d'alt rendiment de cèl·lules T SARS-CoV-2 i anticossos IgG basats en sang sencera capil·lar per mesurar la resposta immune cel·lular i humoral en participants amb diverses comorbiditats i estat previ de vacunació/infecció (taula 1).reclutats a tot el Regne Unit entre el 24 de gener i el 14 de març de 202214. La majoria (90,9%) de les mostres de dits es van obtenir correctament i es van enviar al laboratori en les 24 hores posteriors a la recollida.En alguns casos, les mostres es van rebre dins de les 48 hores posteriors a l'extracció de sang, però cap d'aquestes mostres va passar controls de qualitat i no va afectar les mesures globals de cèl·lules T o anticossos (figura suplementària 5).Tot i que hi va haver diferències en la magnitud de la resposta de les cèl·lules T IFN-γ+ específica del SARS-CoV-2 mesurada en mostres de sang capil·lar i venosa respectives en alguns individus, no hi va haver diferències significatives en general (P = 0,88; Fig. 6 suplementària). ).).
Les respostes de cèl·lules T IFN-γ+ específiques de SARS-CoV-2 van augmentar significativament en individus vacunats que també van informar d'una infecció prèvia (P = 0, 0001), però no significativament més alt que en individus donants no vacunats prèviament infectats (P = 0, 19, Fig. 3a).).Les respostes IgG contra la glicoproteïna de punta (RBD, S1, S2) van ser significativament més altes en els donants vacunats que en els donants no vacunats, independentment de l'estat d'infecció anterior (figura 3b-d).Curiosament, la resposta mitjana d'IgG lligada a N va ser més alta en els participants no vacunats prèviament infectats en comparació amb els participants vacunats, tot i que això no va arribar a ser significatiu (figura 3e).Entre els donants no vacunats i no infectats que es van autodeclarar, 15 dels 37 (40,5%) participants eren positius per a IgG lligada a N, per sobre del llindar establert anteriorment de 2,0 BAU/mL14;aquests 15 participants Dotze d'aquests pacients van resultar positius per a la resposta de cèl·lules T d'IFN-γ+ per sobre del llindar establert prèviament de 22,7 pg/mL d'IFN-γ14.Per tant, és probable que aquests participants estiguessin infectats prèviament amb SARS-CoV-2 i no se'ls va fer la prova de COVID-19 a causa de l'elecció personal, la manca d'equips de PCR i/o de flux lateral, o fossin asimptomàtics.Tot i que hi va haver una correlació significativa entre les respostes de les cèl·lules T als nivells d'IFN-γ+ i d'IgG lligades a N en donants no vacunats (P = 0, 0044; Figura suplementària, la resposta d'IgG lligada a N va disminuir més ràpidament que la resposta d'IgG lligada a N, mentre que l'IFN-γ). + Les respostes de cèl·lules T es van mantenir independentment de l'estat de vacunació, tot i que el nombre de donants a les 50 setmanes posteriors al repte era baix (figura suplementària 8). El tipus de vacunació generalment va ser poc diferent en les respostes d'IgG observades específiques per al SARS-CoV-2, T. cèl·lules i associades a RBD, tot i que els participants que van rebre dues dosis de BNT162b2 seguides de la revacunació de l'ARNm1273 van mostrar nivells significativament més alts de cèl·lules IFN-γ + T eren més sensibles al SARS-CoV-2 que els que van rebre dues dosis de ChAdOx1 i BNT162b2 (suplementari). Fig. 9) A més, les comorbiditats informades tenien poca diferència global en les respostes observades de cèl·lules T en comparació amb els donants sans (figura suplementària 10).
es van mesurar les respostes de cèl·lules T IFN-γ+ específiques de SARS-CoV-2 mitjançant un assaig capil·lar de sang sencera i es van basar en les vacunacions dels participants i l'estat infecciós previ SARS-CoV-2 (confirmat per PCR i/o prova de flux lateral)."Vac + /Inf +" n = 42 (verd), "Vac + /Inf-" n = 158 (blau), "Vac-/Inf +" n = 33 (groc), "Vac- /Inf-" n = 37 (gris).****P <0,0001, ***P = 0,0001, *(Vac+/Inf- vs. Vac-/Inf-) P = 0,045, *(Vac-/Inf+ vs. Vac-/Inf-) P = 0,014 .Reaccions d'unió d'IgG específiques de SARS-CoV-2 al domini d'unió al receptor de l'espiga ("RBD") (b; ****P <0,0001, ns: no significatiu), subunitat d'espiga 1 ("S1") (c; * * **P <0,0001, ns: no significatiu), subunitat d'espiga 2 ("S2") (d; ****P <0,0001, ***P = 0,0005, *P = 0,016) i nucleocàpsida ("N") (e; ****P <0, 0001, ns no significatiu) es van mesurar mitjançant l'anàlisi de sang sencera venosa i basant-se en les vacunacions dels participants i el SARS-CoV-2 anterior (confirmat per PCR i/o anàlisi de flux lateral) Les infeccions es van subdividir per estat."Vac + /Inf +" n = 46 (verd), "Vac + /Inf-" n = 182 (blau), "Vac-/Inf +" n = 34 (groc), "Vac-/Inf-" n = 37 (gris).Les comparacions es van fer mitjançant la prova de Kruskal-Wallis, ajustada per a múltiples comparacions mitjançant la prova de Dunn.Les dades es mostren com a gràfics (línia central a la mediana, límit superior al percentil 75, límit inferior al percentil 25) amb bigotis als valors mínim i màxim.Cada punt representa un donant.Les dades en brut es proporcionen en forma de fitxers de dades en brut.
Com abans, es va demanar als participants que informessin resultats positius de PCR i/o flux sanguini lateral per a COVID-19;segons l'Agència de Salut del Regne Unit, es suposava que els participants estaven infectats amb el coronavirus Omicron (B.1.1.529) en el moment de provar la variant positiva del virus, ja que era la variant dominant al Regne Unit durant el període d'estudi.Entre 299 donants avaluables, vam observar una taxa d'infecció del 8,0% (24/299) en els tres mesos posteriors a la donació capil·lar, set dels quals no estaven vacunats.La proporció de comorbiditats entre tots els participants va ser menor en els que van donar positiu per a la COVID-19 (10,7%) que en els que van donar negatiu per a la COVID-19 (24,4%, taula 1), cosa que pot ser degut al fet que els participants amb certs les malalties tenen més cura i protegeixen de possibles conseqüències com la diabetis i el càncer.Tal com s'ha observat en una cohort de sang venosa, les cèl·lules T positives d'interferó-γ (IFN-γ) de SARS-CoV-2 es van mesurar en mostres de sang capil·lar d'individus que van informar d'una prova de diagnòstic positiva per a COVID-19.La magnitud de la resposta va ser significativament menor que en els donants no infectats (P = 0, 034; Figura 4a) a causa de la inducció relativament pobra d'una resposta de cèl·lules T per vacunació i/o infecció prèvia (figura suplementària 11).De la mateixa manera, ni les respostes d'IgG d'unió a RBD-, S1-, S2 (figures 4b–d) ni les respostes d'anticossos neutralitzadors de RBD-, S1 eren específiques per a SARS-CoV-2 de tipus salvatge o delta (B. 1.617).(Figura suplementària 12).Es poden identificar persones amb un risc significatiu d'infecció.A diferència de la cohort venosa, les respostes d'IgG relacionades amb N tampoc diferencien el risc de COVID-19 (figura 4e), cosa que suggereix que la variant d'Omicron (B.1.1.529) augmenta l'evasió immune en individus prèviament infectats, tal com es va descriure recentment 21. En canvi, la força de la resposta de cèl·lules T IFN-γ específica de SARS-CoV-2 va tornar a ser la variable més important per determinar les probabilitats individuals de donar positiu per a COVID-19 (figura 4f).En general, els participants amb una resposta capil·lar T específica de SARS-CoV-2 ≤23,7 pg/mL IFN-γ tenien un risc d'infecció del 14,9% als tres mesos en comparació amb una resposta >141,6 pg/mL.ml IFN.-γ tenia un risc d'infecció del 4,4% (taula 2).
Respostes de cèl·lules T IFN-γ+ específiques per a SARS-CoV-2 (a; * P = 0,034) i domini d'unió al receptor dirigit a IgG específic per a SARS-CoV-2 ("RBD") (b), subunitat de punta 1 (' S1′) (c), subunitat de punta 2 ('S2') (d) i reacció d'unió a la nucleocàpsida ('N') (e).Els participants identificats com a positius per a les proves de COVID-19 (PCR i/o prova de flux sanguini lateral), totes les infeccions es van produir dins dels 3 mesos posteriors a la presa de mostres de sang.Les comparacions es van fer mitjançant una prova de Mann-Whitney de dues cues.Les dades es mostren com a gràfics (línia central a la mediana, límit superior al percentil 75, límit inferior al percentil 25) amb bigotis als valors mínim i màxim.Cada punt representa un donant.ns no és important.El mapa de calor f mostra les correlacions de rang de Spearman entre variables per al conjunt de dades especificat.Les comparacions que no eren estadísticament significatives es van excloure de la matriu i es van marcar amb cel·les en blanc.Les dades en brut es proporcionen en forma de fitxers de dades en brut.
A mesura que passem a la següent fase de la pandèmia de la COVID-19, l'enfocament passarà de la prevenció a la gestió del risc individual i la identificació dels membres vulnerables de la societat.Establir correlacions d'immunitat a COVID-19 és fonamental per identificar i tractar eficaçment aquests grups d'alt risc.Ara hi ha proves creixents que la immunitat de les cèl·lules T protegeix contra la infecció per SARS-CoV-2 i limita la gravetat de la COVID-1910.Les dades que es presenten aquí demostren que la força combinada de les respostes de cèl·lules T IFN-γ+ específiques de SARS-CoV-2 contra proteïnes estructurals d'espiga, membrana i nucleocàpsida confereixen una protecció més gran contra COVID-19 que la unió d'anticossos.19 promou o neutralitzen les respostes. .i s'han de tenir en compte a l'hora d'avaluar la immunitat individual i/o de ramat.Els virus d'ARN com el SARS-CoV-2 o el virus de la grip A (IAV) eviten la neutralització serològica mitjançant l'evolució ràpida d'epítops de cèl·lules B exposats en antígens de superfície reconeguts pels anticossos.La resposta immune protectora proporcionada per les cèl·lules T pot reflectir l'orientació dels epítops de regions més conservades de proteïnes virals que no poden escapar ràpidament d'una resposta immune.La protecció mediada per cèl·lules T contra noves variants de SARS-CoV-2 és similar a la protecció heterosubtípica mediada per l'orientació de cèl·lules T de proteïnes intrínseques conservades observades en els subtipus IAV22,23.
Malgrat l'enorme potencial per mesurar la resposta immune cel·lular a COVID-19, s'ha prestat relativament poca atenció al desenvolupament d'assajos estandarditzats de cèl·lules T precisos, d'alt rendiment.Les complexitats i els costos tradicionals associats amb la mesura de les respostes de les cèl·lules T impedeixen la determinació precisa de la immunitat de les cèl·lules T quan es fa un cribratge de la immunitat de la població gran.Tot i que recentment han estat disponibles diversos assaigs comercials d'estimulació de pèptids de sang sencera, actualment tothom requereix un flebotomista per obtenir sang, limitant la disponibilitat i l'escala.Els sistemes sanguinis capil·lars s'utilitzen àmpliament per determinar la prevalença d'anticossos SARS-CoV-2 en una població.Hem adaptat els assajos de sang capil·lar per realitzar assajos d'estimulació de pèptids de sang sencera per avaluar la reactivitat de les cèl·lules T a les proteïnes estructurals SARS-CoV-2 i les respostes d'anticossos específics de SARS-CoV-2.De fet, la mesura combinada d'anticossos específics de SARS-CoV-2 i cèl·lules T a la mateixa mostra de sang capil·lar és molt atractiva: (i) redueix la necessitat de múltiples anàlisis de sang per participant, (ii) millora l'experiència i la comprensió dels participants;(iii) millorar la logística i reduir la duplicació, (iv) reduir l'impacte ambiental ja que es requereix menys consumibles de laboratori i lliurament de mostres.Tot i que la reactivitat global de l'IFN-γ va ser similar entre les mostres de sang venosa i capil·lar coincidents, es va observar que era inferior a la cohort de sang capil·lar dels participants (Fig. 4a) en comparació amb la cohort de sang venosa (Fig. 2a).Valors d'IFN-γ Hi ha diverses explicacions per a aquesta troballa, és a dir, un gran nombre de participants amb comorbiditats que requereixen teràpia immunosupressora van ser reclutats a la cohort de mostreig de sang capil·lar (taula 1) i viabilitat i/o funció de les cèl·lules T obtingudes a partir de vasculars. les mostres poden ser baixes, sobretot tenint en compte les condicions d'emmagatzematge a llarg termini de les mostres abans de l'estimulació del pèptid.
La vacuna contra la COVID-19, àmpliament disponible actualment, ofereix la millor protecció contra malalties greus per a la majoria dels receptors en els 6 mesos posteriors a la vacunació8.De manera encoratjadora, malgrat la pobre neutralització serològica induïda per la vacuna de les variants del SARS-CoV-26,7, les respostes de cèl·lules T provocades per la vacunació contra el SARS-CoV-2 de tipus salvatge es van mantenir altament reactives, ja que van sorgir 25 altres.Les dades que presentem aquí demostren la importància d'una avaluació més àmplia de la immunogenicitat de la vacuna, destacant les vacunes amb una immunitat insuficient de cèl·lules T per prevenir la infecció sobtada i la transmissió persistent del virus.També vam observar que molts individus no vacunats reclutats a la cohort capil·lar tenien una resposta significativa de cèl·lules T específiques de SARS-CoV-2 (i IgG d'unió a N) independentment de la vacunació prèvia, que probablement es deu a una infecció prèvia.En lloc de vacunar les persones adequades, s'hauria d'avaluar el seu risc d'infecció en funció del seu estat d'immunització actual i de les eleccions informades preses.
Les limitacions d'aquest estudi inclouen la garantia que els participants van informar d'una infecció per SARS-CoV-2 després de la recollida de sang per determinar la rellevància de la immunitat;alguns participants poden tenir una infecció asimptomàtica i no es poden sotmetre a PCR i/o proves de flux lateral per COVID-19.El nostre conjunt de dades també no tenia informació sobre els medicaments dels participants en el moment de la presa de sang.A més, atès que tots els nostres participants van informar només de símptomes lleus/moderats o cap símptoma, no va ser possible identificar respostes immunitàries del nostre conjunt de dades que prediquessin un augment del risc de malaltia greu i hospitalització per COVID-19.Tanmateix, la presència de respostes de cèl·lules T CD8+ contra epítops específics de la nucleocàpsida s'ha associat recentment amb la protecció contra COVID-1926 greu.A més, l'assaig utilitzat aquí no va mesurar les respostes de cèl·lules T a proteïnes no estructurals SARS-CoV-2 expressades precoçment específiques que recentment s'han demostrat que s'acumulen preferentment en treballadors sanitaris seronegatius que han estat en contacte amb pacients infectats.A partir d'aquest treball, donada la prevalença de la transmissió comunitària en el moment del reclutament i l'alta probabilitat d'infecció per contacte a la població, el nombre de cèl·lules T específiques de SARS-CoV-2 que es troben a les nostres proves també sembla ser capaç d'eliminar-se.infeccions subclíniques a les nostres cohorts.Finalment, no vam mesurar la producció d'interleucina 2 per les cèl·lules T perquè el nostre treball anterior va demostrar una mala identificació de les respostes específiques de les cèl·lules T de SARS-CoV-214, tot i que les respostes específiques d'IL-2 poden indicar una reactivitat creuada preexistent.cèl·lules associades a la defensa contra la infecció per SARS-CoV-211.
En conjunt, aquestes dades posen de manifest la necessitat fonamental d'estudis longitudinals a llarg termini que incorporin respostes de cèl·lules T específiques de SARS-CoV-2 en mesures d'immunitat a escala poblacional.Aquests esforços poden ser ajudats pel desenvolupament d'una nova prova de sang capil·lar que mesura la resposta de les cèl·lules T.
El projecte d'investigació va reclutar participants entre febrer de 2021 i març de 2022. La cohort de donants sans (n ​​= 148) que van donar mostres de sang venosa estava formada principalment per personal universitari i estudiants que participaven en el servei de detecció de COVID-19 de la Universitat de Cardiff o personal d'una escola primària de Cardiff.Tots els participants estaven sans i no van informar de prendre cap fàrmac immunosupressor (vegeu les característiques de la taula 1).La cohort de participants que van donar mostres de sang capil·lar va incloure tots els donants voluntaris (de més de 18 anys) de tot el Regne Unit.Entre el 24 de gener i el 14 de març de 2022, es van inscriure a l'estudi 342 participants, dels quals 299 van enviar mostres de sang al laboratori.Molts participants es van mantenir sense vacunar i/o van informar de comorbiditats greus, incloses malalties autoimmunes i càncer (vegeu les característiques de la taula 1).Aquest estudi va rebre l'aprovació ètica del Comitè d'Ètica de Recerca de Newcastle i North Tyneside 2 (ID IRAS: 294246) i el Comitè d'Ètica de Recerca de la Facultat de Medicina de la Universitat de Cardiff (ref. SREC: SMREC 21/01).Tots els participants van donar el consentiment informat per escrit abans de la inclusió.Els participants no van rebre cap compensació per participar en aquest estudi.
Les mostres de sang venosa es van obtenir per venopunció en vacutainers (BD) de liti o heparina sòdica de 6 o 10 ml.Es van obtenir mostres de sang capil·lar amb una llanceta de dit i després es van recollir en microcontenidors d'heparina (BD).Es requereix un mínim de 400 µl de sang;qualsevol mostra inferior a aquesta quantitat serà rebutjada.Altres raons per al rebuig de la mostra van incloure la coagulació massiva i/o l'hemòlisi i la manca de recollida de plasma viscós per a l'anàlisi (figura suplementària 5).Es disposava d'un total de 299 mostres de sang capil·lar per avaluar les respostes d'anticossos, de les quals 270 mostres també estaven disponibles per avaluar les respostes de les cèl·lules T.
Les respostes de cèl·lules T específiques de SARS-CoV-2 es van avaluar mitjançant l'assaig Immuno-T COVID-19 (ImmunoServ Ltd) i es van realitzar tal com es va descriure anteriorment14.Breument, es va prendre un vacutainer venós d'heparina sòdica (BD) de 6 ml o 10 ml de cada participant i es va processar al laboratori en les 12 hores posteriors a la recollida de sang.Tot i que la majoria d'exemplars es van processar en 24 hores, es va recollir una sang capil·lar de microhemorràgia heparinitzada (BD) de 400-600 μl en les 48 hores posteriors a la presa de mostres.Les mostres de sang venosa i/o capil·lar es van estimular amb conjunts de pèptids separats específics per al SARS-CoV-2 (variant de tipus salvatge) tal com es va descriure anteriorment14.Aquesta biblioteca de pèptids conté 420 seqüències de 15 mers amb 11 aminoàcids superposats que abasten tota la proteïna espiga (S1 i S2) (S; proteïna NCBI: QHD43416 1), fosfoproteïna nucleocàpsida (NP; proteïna NCBI: QHD43423 2) i glicoproteïna de membrana (M). ; Proteïna NCBI: QHD43419 1) seqüències de codificació (anomenades "biblioteca de pèptids combinatoris S-/NP-/M").Tots els pèptids es van purificar a> 70%, es van dissoldre en aigua estèril i es van utilitzar a una concentració final de 0, 5 μg/ml per pèptid.Les mostres es van incubar a 37 ° C durant 20-24 hores.A continuació, es van centrifugar els tubs a 5000 × g durant 3 minuts i es van recollir ~ 150 µl de plasma de la part superior de cada mostra de sang.Emmagatzemeu les mostres de plasma a -20 °C fins a un mes abans d'executar assajos de detecció de citocines/anticossos.
L'IFN-γ es va mesurar mitjançant l'IFN-γ ELISA MAX Deluxe Set (BioLegend, número de catàleg 430116) i es va realitzar segons les instruccions del fabricant.Immediatament després d'afegir la solució d'aturada (2N H2SO4), la microplaca es va llegir a 450 nm mitjançant un lector de plaques BioLegend Mini ELISA.L'IFN-γ es va quantificar mitjançant l'extrapolació de corbes estàndard mitjançant GraphPad Prism.Els valors per sota del límit de detecció inferior de l'assaig es van registrar com a 7,8 pg/ml, els valors per sobre del límit de detecció superior de l'assaig es van registrar com 1000 pg/ml.
Els anticossos IgG anti-SARS-CoV-2 RBD/S1/S2/N es van mesurar mitjançant un panell Bio-Plex Pro Human IgG SARS-CoV-2 4-plex (Bio-Rad, núm. cat. 12014634) i es van etiquetar segons instruccions del fabricant.instruccions.Les mostres que informaven valors per sobre del límit de quantificació es van reanalitzar a una dilució 1:1000.La intensitat mitjana de fluorescència de les perles es va mesurar en un instrument Bio-Plex 200 (Bio-Rad).Les concentracions d'anticossos es van calcular mitjançant l'assaig de control únic VIROTROL SARS-CoV-2 (Bio-Rad) i es van convertir en unitats estàndard de referència internacional OMS/NIBSC 20/136 (BAU/mL) mitjançant el factor de calibratge del fabricant.
Els anticossos neutralitzants específics de la subunitat RBD i S1 contra SARS-CoV-2 de tipus salvatge i delta (B.1.617) es van mesurar amb el kit d'anticossos de neutralització de variants SARS-CoV-2 de Bio-Plex Pro Human (Bio -Rad , núm. de peça 12016897), segons les instruccions del fabricant.Mesureu la intensitat mitjana de fluorescència al Bio-Plex 200 (Bio-Rad) i calculeu el percentatge d'inhibició (és a dir, neutralització) mitjançant la fórmula següent:
Els assajos de neutralització infecciosa del SARS-CoV-2 es van realitzar tal com es va descriure anteriorment28.Breument, es van incubar 600 PFU de SARS-CoV-2 de tipus salvatge amb dilucions en sèrie de 3 vegades de plasma per duplicat durant 1 hora a 37 ° C.A continuació, la barreja es va afegir a les cèl·lules VeroE6 durant 48 hores.Les monocapes es van fixar amb un 4% de paraformaldehid, es van permeabilitzar amb un 0, 5% de NP-40 i es van incubar durant 1 hora en tampó de bloqueig (PBS que contenia 0, 1% de tween i 3% de llet desnatada).Es va afegir un anticòs primari (anti-nucleocàpsid 1C7, Stratech) al tampó de bloqueig durant 1 hora a temperatura ambient.Després del rentat, es va afegir un anticòs secundari (IgG-HRP anti-ratolí, Pierce) al tampó de bloqueig durant 1 hora.Les monocapes es van rentar, es van desenvolupar amb Sigmafast OPD i es van llegir en un lector de plaques Clariostar Omega.Com a controls es van incloure pous sense virus, sense virus però sense anticossos i sèrums normalitzats que mostraven activitat intermèdia.
L'anàlisi estadística es va realitzar a GraphPad Prism (versió 9.4.1).La normalitat del conjunt de dades es va provar mitjançant la prova de Shapiro-Wilk.Es van utilitzar criteris no paramètrics per a totes les comparacions.Es va utilitzar la prova de Mann-Whitney per a mostres no aparellades.Totes les proves eren de dues cares amb un llindar de significació nominal de P ≤ 0,05.
L'anàlisi exploratòria inicial del conjunt de dades es va fer a R (versió 4.0.3).Això inclou el desenvolupament de la matriu de correlació de rang univariant de Spearman, on la correlació entre dues variables està representada per la mida i el color dels quadrats.La significació estadística entre associacions es va calcular mitjançant el rho de Spearman, on es van considerar significatius els valors ≤0,05.Les comparacions que no eren estadísticament significatives es van excloure de la matriu i es van marcar amb cel·les en blanc.Els valors P es van ajustar per a múltiples comparacions mitjançant la correcció de Holm.Es va utilitzar un model de regressió logística binari per simular l'efecte de les variables del conjunt de dades sobre la resposta positiva a la COVID-19.Les respostes de cèl·lules T IFN-γ i les puntuacions de títols d'IgG anti-RBD/S1/S2/N es van convertir en factors, on cada individu es va assignar al quartil adequat per a cada puntuació.Després d'això, es va desenvolupar un model de recerca inicial utilitzant la funció glm del paquet estadístic (V4.0.3).Els odds ratios derivats d'aquest model original es van extreure dels coeficients del model mitjançant la funció 'odds_plot' del paquet OddsPlotty (V1.0.2).En desenvolupar el model de validació creuada, vam utilitzar la funció "bestglm" del paquet bestglm (V0.37.3) per limitar el biaix de l'usuari i garantir que es pugui seleccionar el millor subconjunt de predictors.El mètode escollit va ser "exhaustiu" i el criteri d'informació utilitzat per avaluar l'ajust del model va ser l'AIC.Es va utilitzar el mateix flux de treball descrit anteriorment per obtenir la relació de probabilitats.
Per obtenir més informació sobre el disseny de l'estudi, consulteu el resum de l'estudi Nature enllaçat a aquest article.
Les cartes i les sol·licituds de materials s'han d'adreçar al doctor Martin Scarr o al professor Andrew Godkin.Aquest article proporciona les dades originals.
El codi R utilitzat per crear models estadístics està disponible públicament sense sol·licitud29.Podeu trobar informació i llicències de reimpressió a www.nature.com/reprints.
Munro, APS et al.Seguretat i immunogenicitat de set vacunes COVID-19 com a tercera dosi (reforç) després de dues dosis de ChAdOx1 nCov-19 o BNT162b2 (COV-BOOST) al Regne Unit: un assaig de fase 2, cec, multicèntric, aleatoritzat i controlat.Lancet 398, 2258–2276 (2021).
Stewart, ASV et al.Immunogenicitat, seguretat i reactogenicitat de la vacunació primària heteròloga contra COVID-19 (Com-COV2) mitjançant ARNm, vectors virals i vacunes adjuvants de proteïnes al Regne Unit: un assaig de fase 2, simple cec, aleatoritzat, prova de no inferioritat.Lancet 399, 36–49 (2022).
Lee, ARIB et al.Eficàcia de les vacunes contra la COVID-19 en pacients immunodeprimits: una revisió sistemàtica i metaanàlisi.BMJ 376, e068632 (2022).
Dejnirattisai, W. et al.Disminució de la neutralització de la variant B.1.1.529 del SARS-CoV-2 micres per sèrum després de la immunització.Lancet 399, 234–236 (2022).
Lipsich M, Krammer F, Regev-Yohai G, Lustig Y i Baliser RD Infecció innovadora en individus vacunats amb SARS-CoV-2: mesura, causes i conseqüències.Sacerdot Nacional d'Immunologia.https://doi.org/10.1038/s41577-021-00662-4 (2021).
Levin, EG et al.Resposta humoral immune debilitat a la vacuna BNT162b2 Covid-19 durant 6 mesos.N. eng.J. Medicina.385, e84 (2021).
Carreño, JM et al.Activitat de sèrums convalescents i vacunals contra SARS-CoV-2 Omicron.Nature 602, 682–688 (2022).
Chemaitelly, H. et al.Durada de la protecció de la vacuna d'ARNm de Qatar contra les subvariants Omicron BA.1 i BA.2 del SARS-CoV-2.medrxiv https://doi.org/10.1101/2022.03.13.22272308 (2022).
Tai, MZ et al.La freqüència de les cèl·lules B de memòria disminueix amb la infecció innovadora de la vacuna delta COVID-19.Medicina Molecular EMBO.14, e15227 (2022).
Kundu, R. et al.Les cèl·lules T de memòria de reacció creuada estan associades amb la protecció dels contactes de COVID-19 de la infecció per SARS-CoV-2.Comuna Nacional.13, 80 (2022).
Geurtsvan Kessel, CH et al.Respostes distintives de cèl·lules T i cèl·lules B omicron-reactives del SARS CoV-2 en receptors de la vacuna COVID-19.la ciència.Immunologia.https://doi.org/10.1126/sciimmunol.abo2202 (2022).
Gao, Yu et al.Les cèl·lules T heretades específiques de SARS-CoV-2 reconeixen les variants d'Omicron.Medicina nacional.28, 472–476 (2022).
Scarr, MJ et al.La mesura de les cèl·lules T específiques de SARS-CoV-2 de sang sencera revela la infecció asimptomàtica i la immunogenicitat de la vacuna en individus sans i pacients amb càncer d'òrgans sòlids Immunologia https://doi.org/10.1111/imm.13433 (2021).
Tan, AT et al.Mesura ràpida de les cèl·lules T de punta SARS-CoV-2 a la sang sencera d'individus vacunats i infectats de manera natural.J. Clínica.invertir.https://doi.org/10.1172/JCI152379 (2021).
Tallantyre, EU et al.Resposta a la vacuna contra la COVID-19 en pacients amb esclerosi múltiple.instal·lar.Neurones.91, 89–100 (2022).
Bradley RE et al.La infecció persistent per COVID-19 amb la síndrome de Wiskott-Aldrich va desaparèixer després de la vacunació terapèutica: un informe de cas.J. Clínica.Immunologia.42, 32–35 (2022).